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    高危型HPV的致病機制、檢測方法及防治
    發布時間:2020-12-16

      關鍵詞: 宮頸癌; 人乳頭狀瘤病毒; 致病機制;

      宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤之一,而宮頸癌組織中人乳頭瘤病毒(HPV)檢出率高達99%,因此HPV感染被認為是宮頸癌和子宮頸上皮內瘤變(CIN)的必要條件。HPV具有多種不同亞型,其中高危型HPV感染致病的概率顯著高于低危型HPV,高危型HPV的具體致病機制十分復雜。近年來發現了多種新的致病機制和影響因素,為HPV相關宮頸疾病的早期篩查、預防和新藥研發提供了新思路,本文就高危型HPV的致病機制、檢測方法、預防與治療等方面研究進展作一綜述。

      1、 HPV概述

      HPV是一類小型、無包膜、環狀、雙鏈DNA病毒,是宮頸癌和CIN的重要致病因素。HPV亞型較多,根據致病力的高低分為高危型和低危型,低危型包括HPV-1、2、3、4、6、7、10、11、13、32、34、40、42、43等,高危型包括HPV-16、18、31、33、35、39、52、58、59等[1]。HPV感染可導致患者宮頸病變,多表現為陰道分泌物增多、陰道不規則出血、宮頸糜爛和下腹部疼痛等臨床癥狀[2]。HPV主要通過性傳播[3],男性患者生殖器感染率雖高于女性,但病毒持續存在的可能性小,因此通常不會致癌,而女性患者因宮頸和陰道的結構有利于病毒的生存,是主要受害者,宮頸癌在婦科癌癥中排名第四;超過2/3的患者來自于南非和拉丁美洲等欠發達地區,并成為該地區癌癥死亡的主要原因[4]。高危型HPV-16、18在宮頸病變患者中檢出率最高[5],約占HPV所有亞型的71%,研究高危型HPV的致病機制、檢測方法和預防方法等對于宮頸癌的早期篩查和治療具有重要意義。

      2、 HPV引發宮頸癌的致病機制

      HPV有3個基因功能區:早期區、晚期區和上游調控區,其中早期區編碼早期蛋白E1、E2、E4、E5、E6和E7,參與調節病毒的生命周期、調控DNA復制、轉錄和病毒蛋白的翻譯等[6];晚期區編碼晚期蛋白L1和L2,即病毒的衣殼蛋白,主要參與細胞表面吸附、病毒顆粒包裝及病毒進入細胞質過程;上游調控區含有順式調控單元及病毒復制的起點,負責調控病毒基因的復制和轉錄。

      2.1、 E2參與調節HPV的轉錄

      E2蛋白在HPV的轉錄過程中發揮著不同的調節作用,主要體現在病毒感染的時期。在與宿主基因組整合前,病毒僅處于潛伏期,E2蛋白可與靶位點E2BSs結合,通過特異性蛋白1(Sp1)和TATA結合蛋白(TBP)的移位抑制病毒轉錄。有研究表明,在導入了E2基因的宮頸癌細胞SiHa中,癌細胞的增殖明顯下降,凋亡率明顯上升[7];而在與宿主基因組整合后,病毒進入了活躍期,E2基因被甲基化促進了HPV的轉錄、增殖[8]。

      2.2 、E5維持HPV持續感染并介導免疫逃逸

      在高危型HPV基因組與宿主整合后,宮頸復層鱗狀上皮基底細胞內的E5蛋白會上調受體酪氨酸激酶(Met)的表達,以維持病毒的生命周期、復制和轉錄過程[9]。面對外源DNA的入侵,宮頸上皮細胞可在基底層分裂后凋亡、脫離,這種方式有利于機體降低病毒DNA的數量[10],然而E5蛋白可通過激活表皮生長因子受體(EGFR),一方面延緩基底細胞的分裂和分化進程,另一方面上調環氧合酶-2的表達,刺激促凋亡相關基因Bax的降解作用,從而達到持續感染上皮細胞的目的[11]。此外,E5蛋白還可與V-型ATP酶質子泵的亞基相互作用,延緩了EGFR的降解,也有助于維持細胞內病毒的持續感染[12]。在宮頸癌發病初期,宿主會產生大量CD8+T細胞,CD8+T細胞通過識別腫瘤細胞表面主要的組織相容性復合體Ⅰ類分子(MHC-Ⅰ)直接殺死腫瘤細胞,而E5蛋白的疏水區能與MHC-Ⅰ類分子重鏈相互作用,抑制MHC-Ⅰ的抗原提呈作用,盡量減少免疫應答發生的可能,維持被HPV感染腫瘤細胞的持續存在[13]。腫瘤細胞這種逃避免疫應答的機制使HPV更容易在體內定植,使宿主的抗病毒能力下降,從而有助于HPV持續感染狀態的維持。
     

    高危型HPV的致病機制、檢測方法及防治
     

      2.3 、HPV E6、E7是關鍵的致癌基因

      低危型和高危型HPV的致病力差異主要體現在HPV E6、E7蛋白,低危型HPV E6、E7蛋白僅存在于被感染細胞的胞質,并不能誘導惡性轉化[14]。而高危型HPV E6、E7蛋白可以進入宿主細胞核,是維持HPV陽性癌細胞惡性表型的關鍵因素,與細胞轉化和永生密切相關。研究表明HPV E6基因表達產物可結合并誘導p53基因降解,以阻止腫瘤細胞凋亡,此外,高危型HPV E6蛋白的羧基端存在PDZ結合模序(PBM),其與PDZ蛋白的相互作用,促進病毒DNA進入細胞內,繼而引發感染[15];HPV E7的基因表達產物以腫瘤抑制基因pRb為靶點并與之結合,能促進腫瘤細胞進入S期,從而得以永生。HPV E6、E7蛋白促進宮頸癌發生的其他機制如下。(1)HPV E6、E7蛋白通過內源性調控分子miRNA參與腫瘤的發病進程,例如,HPV E6、E7蛋白能特異性上調miR-146b-3p,從而抑制15羥基-前列腺素脫氫酶的作用,發揮了促進宮頸癌細胞增殖和遷移的作用,從而導致癌變的發生[16];HPV E6蛋白可以使miRNA-20a的表達增加,從而使細胞程序性死亡蛋白6上調,促進宮頸癌細胞的增殖[17];HPV E7蛋白能與pRB結合,導致宮頸上皮miR-182表達上調[18],導致被感染細胞癌變。(2)HPV E6、E7蛋白通過長鏈非編碼RNA(lncRNA)參與腫瘤的發病進程,HPV E6、E7蛋白通過轉錄因子c-Myc增加lncRNA SNHG12的水平,促進E-鈣黏著蛋白轉錄抑制因子Slug的表達,從而降低組織內細胞黏附強度,促進宮頸癌細胞的遷移、侵襲和上皮間質轉化(EMT)能力[19],而lncRNA TMPOP2的異位表達也可上調HPV E6、E7基因,維持宿主體內宮頸癌細胞的存在[20]。另有研究發現了一類新的lncRNA———lnc-CCDST,具有抑制宮頸癌細胞運動和血管生成的功能,而HPV E6、E7蛋白能降低lncCCDST的表達,促進宮頸癌的進一步發展[21]。(3)HPV E6、E7蛋白通過影響信號通路參與腫瘤的發病進程,Toll樣受體(TLR)是參與人類非特異性免疫的識別受體,廣泛表達于人類惡性腫瘤組織中,HPV E6蛋白能與TLR-2、3、7、8、9等相互作用,破壞免疫反應,從而促進HPV致癌[22]。研究表明,高危型HPV E6、E6*蛋白能介導T細胞因子4(TCF-4)的轉錄因子與β-catenin結合,促進癌細胞增殖,并誘導TCF-4的穩定化,上調Wnt/β-catenin信號通路,有助于維持癌細胞的轉化和永生化[23]。此外,HPV E6蛋白可通過促進calcineurin-NFAT2信號通路的表達,從而促進宮頸癌的進展[24]。(4)HPV E6、E7蛋白通過其他途徑影響腫瘤的發病進程,例如HPV E6、E7基因可增加白細胞介素-6在宮頸癌細胞中的表達,造成長時間持續的炎癥和高度增殖的微環境,從而有利于腫瘤發生[25]。同時,HPV E6、E7蛋白還可上調pirin基因表達以促進EMT,對宮頸癌的發展起著重要作用[26]。

      3 、高危型HPV的實驗室檢測方法

      3.1、 傳統檢測方法

      高危型HPV的檢測對于宮頸癌的篩查、預防和治療具有重要意義,其傳統檢測方法主要基于細胞學,如宮頸涂片和液基細胞學等,傳統檢測方法的特異度較高,但靈敏度不夠高;使用針對病毒L1蛋白的單克隆抗體也可檢測子宮脫落細胞中的HPV,方法簡便、經濟、易操作,但僅能判斷患者是否感染HPV,適用于普查[27]。

      3.2、 基于DNA的檢測方法

      HPV DNA檢測的基本原理是針對HPV基因組特定序列設計引物和/或探針,對病毒進行定性或定量檢測,相對于傳統檢測方法,其靈敏度和特異度較高,可實現HPV分型,但檢出HPV DNA僅能說明病毒存在,并不代表發生了宮頸病變。近年來,新的檢測方法不斷出現,且取得了明顯進展,但仍各有利弊,例如芯片雜交技術通過酶標HPV靶基因序列,與固相支持物上的探針分子進行雜交、顯色,具有通量高、速度快的特點,一次性可實現多種HPV亞型分析,但該方法操作復雜,且容易造成交叉污染。AdvanSure和雙巢式PCR是基于PCR進行改良方法,通過多重引物的設計實現了多重HPV亞型的檢測[28,29],該方法具有較高的靈敏度,但檢測過程中易發生污染。第二代雜交捕獲技術(HC2)通過放大抗體捕獲的信號實現靶標檢測,此方法無需經過PCR擴增就能實現13種高危型HPV的半定量檢測,操作簡便、特異度高,有效避免了分子擴增過程中可能出現的污染,但該方法檢測靈敏度較低,且不能區分多重感染。酶切信號放大技術利用特異性酶識別并切割病毒DNA分子,通過分子雜交和化學信號放大直接檢測特定DNA序列,此方法不會造成擴增時可能引起的交叉污染,對樣本體積需求量小,可避免因樣本量不足引起的假陰性,但能夠檢測的HPV亞型有限。數字PCR技術也被稱為“第三代PCR”,無需標準曲線就能實現分子靶標的絕對定量檢測,檢測靈敏度高,定量準確,但其檢測通量低,檢測成本高,操作復雜,目前難以在臨床廣泛應用。盡管HPV DNA的檢測技術在不斷更新優化,但仍難以區分HPV的一過性感染和癌前病變,因此陽性檢測結果可能會導致不必要的臨床治療。

      3.3 、基于RNA的檢測方法

      在病毒感染的過程中HPV E6、E7基因會大量表達mRNA,從而產生大量致癌蛋白,使宮頸細胞逐漸發生癌變,因此病毒mR-NA檢測是一種新的方式。Aptima逆轉錄擴增法利用轉錄介導的擴增技術(TMA)檢測HPV E6、E7mRNA[30],是目前唯一一個被美國食品及藥物管理局(FDA)批準用于檢測HPV mRNA的技術,HPV E6、E7mRNA的檢出意味著病毒處于活躍期,與宮頸癌的關系更為密切,能有效減少對一過性HPV的檢出,從而減少受檢婦女不必要的陰道鏡轉診和不必要的心理壓力。最新的研究表明,采用熒光原位雜交技術檢測宮頸脫落細胞中Survivin mRNA的表達同樣可用于宮頸病變篩查,提高了高度CIN和宮頸癌診斷的準確性和可預測性[31]。宮頸癌篩查的最佳策略是實現益處最大化和危害最小化,發現那些有可能發展為癌癥的宮頸癌前病變,同時避免對一過性HPV感染導致的良性病變的檢測和過度治療,因此與傳統DNA檢測相比,檢測HPV E6、E7 mRNA不但靈敏度高,而且特異度更高,但因mRNA易發生降解,對樣本質量的要求也更高。

      4、 高危型HPV的預防與治療

      控制宮頸癌的發病率可通過兩種方式實現,一是預防癌前病變,二是盡早發現并治療癌前病變,以遏止其發展為癌癥。預防性疫苗是預防宮頸癌最有效的方法[32]。基本原理是將HPV的衣殼蛋白和病毒樣顆粒注射入人體,通過抗原表位的特異性刺激機體產生相應的抗體以預防病毒侵襲,目前有3種HPV疫苗,根據可預防的亞型種類分為二價苗、四價苗和九價苗,其中以二價苗的免疫效價最高[33],青少年因性器官發育尚未成熟,免疫功能低下,所以是重點接種人群,及早接種預防性HPV疫苗能有效防治HPV的持續性感染并降低宮頸癌的發病率。治療性疫苗針對的靶抗原是HPV E6、E7蛋白,通過重新激發特異性T細胞介導的免疫反應,以清除被病毒感染或已變異的細胞,根據載體不同,HPV治療性疫苗分為DNA疫苗、亞單位疫苗、活載體疫苗、樹突狀細胞疫苗等[34]。除病毒載量和病毒類型之外,衣原體感染、長期吸煙、多胎生育和長期使用激素類避孕藥也是增加宮頸癌風險的相關因素。加強生活習慣方面的認知,早期篩查、疫苗和藥物的介入有助于降低宮頸癌的發病率和病死率。

      保婦康栓是一類中藥制劑,其中含有冰片與莪術油,不僅具有抗單純游離病毒的感染作用,而且能夠抑制宿主細胞染色體上的病毒基因片段并促進巨噬細胞吞噬病毒的能力。重組人干擾素α-2a是一類廣譜抗病毒藥物,與病灶細胞表面的受體相結合后可抑制病毒蛋白的合成并促進淋巴細胞、吞噬細胞和自然殺傷細胞吞噬被病毒感染的細胞。理解了HPV基因組致病蛋白有助于研制出有效的治療藥物,為臨床治療宮頸癌提供新的思路,例如miR-221可通過SOCS1/TypeⅠIFN信號通路抑制HPV DNA的復制[35]。EGFR抑制劑可控制癌前病變中的E5活性[10];抑制靶向致瘤lncRNA SNHG12和TMPOP2的表達或促進lnc-CCDST的表達可改變HPV E6、E7蛋白的活性[19,20,21],這些成果都有可能成為潛在的治療靶點。

      5、 展望

      HPV對于宮頸癌及CIN的高致病性嚴重影響了女性的健康生活,并帶來了嚴重后果,養成良好的生活習慣,提前預防、早發現、早治療是改善預后的有效措施。雖然近些年來人們對于HPV致病機制的研究已經有了諸多的突破,但仍有許多機制有待于去探索,任重而道遠。

      參考文獻

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