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    VSMCs的自噬激活過程及其存活影響
    發布時間:2020-12-11

      摘    要: 血管平滑肌細胞(VSMCs)是血管壁的重要組成部分,是調節血壓、向周圍組織輸送氧和營養物質的基礎細胞之一。多種因素通過調節VSMCs自噬影響VSMCs的生存狀態,引起VSMCs生物學行為的變化,從而參與血管相關疾病的發生與進展。以調節VSMCs自噬為靶向,可為尋找防治血管相關疾病策略提供新思路。

      關鍵詞: 血管平滑肌細胞; 自噬; 氧化應激; 代謝; 血管相關疾病;

      Abstract: Vascular smooth muscle cells(VSMCs)are the major cell type of vascular wall that regulates blood pressure,and delivers oxygen and nutrients to surrounding tissues.Multiple factors influence the survival of VSMCs through autophagy,resulting in the change of VSMC biological behavior.Furthermore,autophagy is involved in the occurrence and progress of blood vessel related-diseases.Therefore,balancing autophagy can provide new ideas for the prevention and treatment of vascular-related diseases.

      Keyword: vascular smooth muscle cell; autophagy; oxidative stress; metabolism; vascular disease;

      血管平滑肌細胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)是血管壁中間層的唯一細胞類型,細胞內Ca2+與鈣調蛋白相互作用調節平滑肌細胞收縮和松弛,進一步調控血管張力和血流量,從而參與血壓調節、氧與營養運輸。自噬泛指細胞內需要降解的細胞器、蛋白質等成分被運輸到溶酶體進行降解的細胞分解過程,實現細胞代謝的需要和細胞器的更新。有研究認為,自噬是高度易誘導、精細調控的細胞生物過程,是細胞內穩態的主要協調者,饑餓、各種病理或雷帕霉素等藥物刺激均可引起自噬,從而影響細胞結構與功能[1,2]。研究表明,VSMCs自噬在許多血管疾病發生過程(包括再狹窄、動脈粥樣硬化和高血壓)中被激活,可加速衰老、促進新生內膜形成,進而參與多種血管相關疾病的進展,這對于VSMCs存活和可塑性非常重要。現綜述VSMCs的自噬激活過程及自噬對VSMCs存活的影響。

      1 、血管平滑肌細胞自噬的激活

      根據底物運送到小體或液泡的不同途徑,自噬的形成分為3種類型:分子伴侶介導的自噬、微自噬和巨自噬[3]。分子伴侶介導的自噬是通過溶酶體膜上的蛋白轉運系統將胞內底物轉位至溶酶體進行降解的過程[4];微自噬是通過溶酶體或液泡膜的直接內陷、突起或隔膜作用,將胞漿內的底物轉入溶酶體或液泡中進行降解的過程;巨自噬的特征是形成一個細胞相關的雙膜小泡,包裹底物形成自噬體,與溶酶體融合后降解的過程[3]。在自噬的三種形式中,巨自噬是研究最廣泛、最具代表性的自噬過程,因此下述提及的自噬專指巨自噬。

      1.1、 氧化應激

      氧化應激與自噬激活有關,過氧化氫(H2O2)等活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)可以直接修飾自噬途徑的關鍵成分,如ATG4的半胱氨酸殘基,進而將氧化還原調節與自噬激活結合起來[5]。現已證明,ROS能夠直接促進VSMCs自噬[6,7],并且參與了尼古丁誘導VSMCs自噬[8]。可以說,VSMCs自噬與ROS產生具有直接或間接的關系。然而,ROS增加并不一定總是伴隨VSMCs自噬增加。例如,干擾素治療能強烈提高動脈粥樣硬化病變區域平滑肌細胞中載脂蛋白L6(apolipoprotein6,ApoL6)表達,ApoL6的過度表達促進ROS產生、凋亡增加、并抑制自噬[9]。顯然,這種情況下過量產生的ROS不能完全對抗ApoL6的作用,也不能誘導自噬。
     

    VSMCs的自噬激活過程及其存活影響
     

      氧化應激的次級產物也參與了自噬的激活過程。當含有多不飽和脂肪酸的脂質與自由基發生過氧化作用時,形成氧化磷脂類物質,如游離醛4-羥基壬烯醛(4-hydroxynonenal,4-HNE)、生物活性核心醛1-棕櫚酰-2-(5-氧戊酰)-sn-甘油-3-磷酰膽堿[1-palmitoyl-2-(5-oxovaleroyl)-sn-glycero-3-phosphocholine,POVPC]、強電子醛類丙烯醛等,它們均可以激活VSMCs自噬,且激活自噬的程度與其自身親電性有關。4-HNE的非親電子類似物—壬醛,不誘導自噬;輕度親電子類似物—壬烯醛,適度促進LC3-II轉化;高親電子脂質HNE和丙烯醛顯著增加自噬[10]。因此,脂質氧化產生的親電產物激活VSMCs自噬。此外,POVPC可以激活cAMP/R-Ras/PI3K自噬通路,引起VSMCs自噬[11]。這些氧化磷脂類物質在糖尿病血管增殖反應、血管炎及動脈粥樣硬化等病變血管組織積累,并與VSMCs增殖、表型轉換和細胞凋亡有關。

      1.2、 細胞因子和生長因子

      VSMCs自噬受到許多細胞因子和生長因子調控,從而影響VSMCs的生物學行為,參與血管相關疾病的發生與進展[12]。

      腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)存在于動脈粥樣硬化斑塊分離的VSMCs中,在炎癥過程中由活化的巨噬細胞和VSMCs分泌,TNF-α可單獨或聯合其他細胞因子刺激VSMCs凋亡、誘導自噬、增加Beclin-1表達,這一作用與c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)活化和Akt抑制有關[13]。骨橋蛋白(osteopontin,OPN)作為一種新型細胞因子,可以有效激活VSMCs自噬。研究發現[14],在腹主動脈瘤組織中,LC3和自噬相關基因Atg4b、Beclin1/Atg6、Bnip3和Vps34表達明顯上調,這些變化與OPN豐度顯著增加呈正相關。用OPN處理VSMCs,能顯著增加自噬小體的形成、自噬相關基因的表達以及細胞死亡;有趣的是,雖然OPN可激活p38絲裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)、細胞外調節蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)和JNK等多種激酶,但只有抑制p38 MAPK途徑才能有效抑制OPN誘導的自噬,說明OPN誘導的自噬僅需要激活p38 MAPK,而不需要激活VSMCs的ERK或JNK;整合素抑制劑或抗CD44抗體能阻斷OPN誘導的自噬。因此,OPN通過激活整合素/CD44和p38信號分子激活自噬,引起VSMCs死亡。

      血小板衍生生長因子(platelet-derived growth factors,PDGF)由血小板、內皮細胞和巨噬細胞分泌,可以刺激誘導VSMCs自噬,在使VSMCs免受高氧化應激損傷的同時,刺激其增殖和遷移,被認為是動脈粥樣硬化和血管再狹窄的主要參與者[15]。與HNE誘導的自噬一樣,PDGF誘導的自噬增強了親電性脂質損傷蛋白的降解能力,這一過程與AMP依賴的蛋白激酶[adenosine 5′-monophosphate(AMP)-activated protein kinase,AMPK]磷酸化增強或mTOR抑制無關[15]。盡管PDGF可以刺激OPN,但目前尚不清楚PDGF和OPN介導的自噬之間是否存在直接聯系;PDGF和OPN是否整合促進生長因子介導的自噬也不清楚。此外,胰島素樣生長因子-1(insulin-like growth factor-1,IGF-1)通過Akt通路抑制VSMCs自噬而延長細胞存活時間[13]。

      1.3 、代謝應激

      饑餓和營養缺乏或過剩應激是細胞自噬的激活因素[1],但體內代謝應激影響VSMCs的作用機制尚不完全清楚。高脂飲食喂養小鼠8周,提高了肥胖小鼠血管組織Atg7和LC3-II表達,且電鏡顯示肥胖小鼠血管組織中自噬溶酶體樣空泡與正常小鼠相比增加了2倍;成骨細胞分泌的骨鈣素,除了調節糖脂代謝外,還可以逆轉高脂飲食誘導的血管內皮細胞(vein endothelial cells,VECs)和VSMCs自噬;骨鈣素可以逆轉體外培養的VSMCs自噬、內質網應激以及受損的胰島素信號傳導,抑制蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)或核因子κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)可廢除骨鈣素的有利作用,表明骨鈣素可能以NF-κB依賴方式通過Akt/mTOR信號通路逆轉異常自噬和內質網應激[16]。此外,胰島素可激活PI3K/Akt/mTOR通路,抑制自噬[17],同樣具有抑制VSMCs自噬的作用[13],然而,胰島素信號通路如何調控VSMCs自噬、功能和代謝仍有待進一步研究確定。

      1.4 、缺氧

      缺氧在引發諸多病理過程或疾病的同時,也促進了肺VSMCs自噬。研究顯示,缺氧或低氧引起肺動脈高壓患者肺VSMCs的AMPK活化和磷酸化增強,抑制AMPK A1阻止了低氧誘導的自噬進而導致細胞死亡;然而,激活AMPK A2可維持MCL-1表達并防止細胞凋亡,AMPK抑制劑復合物C逆轉了低氧誘導的肺動脈高壓,提示AMPK激活在缺氧引起肺VSMCs自噬中發揮關鍵作用,AMPK A1和A2分別通過自噬或凋亡的不同機制對肺VSMCs存活具有不同的調節作用[18]。

      1.5、 血管緊張素II

      血管緊張素II(angiotensin II,Ang II)激活VSMCs自噬、增強VSMCs收縮功能與高血壓的發生密切相關。不同劑量的Ang II作用大鼠VSMCs不同時間后,可劑量依賴、時間依賴性增加ROS生成量、增加LC3-II/LC3-I與Beclin-1表達、降低SQSTM1/p62表達,增加了自噬小體的形成;Ang II增加ROS產生的作用可分別被Ang II型1受體阻滯劑(Ang II type 1 receptor(AT1R)blockers,ARB)、NADPH氧化酶抑制劑、線粒體KATP通道抑制劑廢除;Ang II增加自噬的作用可分別被自噬抑制劑3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)或Bafilomycin A1、ARB(且呈劑量依賴性)、NADPH氧化酶抑制劑、線粒體KATP通道抑制劑以及siRNA Atg5廢除;這些結果表明,Ang II激活VSMCs自噬的作用是通過激活AT1R、NADPH氧化酶以及線粒體KATP通道實現的[19]。此外,ARB、RhoA/Rho激酶抑制劑也同樣發揮了對Ang II激活VSMCs自噬的抑制作用,說明Ang II的作用是AT1R/RhoA/Rho激酶依賴的[20]。

      2、 自噬對血管平滑肌細胞存活的影響

      在不同條件下,自噬對VSMCs存活具有特殊的影響,發揮著有利于細胞存活、加速細胞死亡的雙重作用,進而參與血管相關疾病的發生發展。

      在一定條件下,自噬激活可引起VSMCs壞死和凋亡[21]。在動脈粥樣硬化病變中,TNF-α可調節斑塊內VSMCs自噬,引起VSMCs凋亡[13],該作用是主要通過JNK、PKB/Akt誘導的LC3 mRNA和Jun誘導的Beclin-1表達實現的[22]。相反,IGF-1可通過Akt抑制LC3 mRNA表達,抑制斑塊中VSMCs自噬以保護VSMCs避免死亡[13]。IGF-1還可抑制血清缺失對線粒體自噬的影響,有助于延長細胞壽命[23]。OPN誘導的VSMCs自噬可促進VSMCs死亡[14]。AngⅡ誘導的VSMCs自噬在血管損傷中起著細胞毒性作用,不僅造成細胞凋亡,還可能誘導細胞鈣化或遷移[19]。這些結果表明,在一些特定的條件下,自噬激活對于VSMCs生存有不利的影響。然而到目前為止,自噬是通過何種機制促進細胞凋亡、破壞仍有待闡明。考慮到自噬可以通過不同的方案來降解未折疊蛋白質和受損細胞器等成分,也可能發生在嚴重應激所致的過度“自食”過程中,因此可以推測在某些嚴重的應激條件下,VSMCs自噬會造成細胞發生過度的自我消化,從而導致細胞死亡。

      與之相反,一些實驗表明自噬對VSMCs具有一定的保護作用。在低氧[18]、4-NHE[24]、POVPC[10]和7-酮基膽固醇[25]等條件的誘導下,自噬通過降解未折疊蛋白質和受損細胞器等成分,進而保護VSMCs免受細胞死亡。超負荷的游離膽固醇激活VSMCs自噬,同樣通過降解線粒體和內質網等功能失調的細胞器而形成的一種防止VSMCs死亡的細胞防御機制;3-MA抑制線粒體去極化導致細胞凋亡和壞死,而RAPA通過減輕內質網應激從而抑制膽固醇作用后的細胞死亡[26]。在上述應激條件下,自噬通常作為一種內務管理作用——作為VSMCs的一種生存機制被激活,防止細胞死亡。

      此外,自噬對不同類型細胞的作用不同,因此自噬也可能參與了各種血管疾病中血管細胞之間的相互作用。在早期動脈粥樣硬化斑塊中,VSMCs、VECs和巨噬細胞的自噬激活,有利于應對輕至中等強度的應激;但過度氧化應激引起的自噬無法充分降解受損的線粒體,導致細胞色素c從線粒體中漏出,從而激活細胞內固有的凋亡通路。可見,適當自噬可以抑制動脈粥樣硬化斑塊的進展并增加動脈粥樣硬化斑塊的穩定性,過度自噬可能引起自噬樣VSMCs死亡,進一步引起斑塊的不穩定性。

      盡管自噬在不同疾病中的作用并不一致,但自噬在疾病的不同階段發揮不同的作用。生理條件下或某些血管疾病的早期,自噬起著內務管理作用,保護VSMCs的結構完整,維持功能;然而當自噬超過一定閾值時,通過一種不受抑制的自噬參與應激反應,搭建了另一種細胞死亡途徑,最終導致整個細胞結構與功能的崩潰,導致細胞死亡。

      3 、小結與展望

      自噬是真核細胞對外界環境刺激做出反應、維持內環境穩態的一種自我保護機制。氧化應激、代謝應激、缺氧、細胞因子與血管活性物質均可激活VSMCs自噬,引起VSMCs病理性重構;適度自噬可保護細胞免受惡劣應激的影響,過度自噬最終會導致細胞“自食性”死亡;二者共同參與了血管相關疾病的發生發展。目前,對于VSMCs與自噬的研究集中在細胞與動物實驗,也闡明了一些信號通路或分子在VSMCs自噬及其表型轉換中的機制,但如何將相關的研究轉化應用于血管相關疾病的臨床防治還有很多的工作要做;同時,對于界定VSMCs適度自噬與過度自噬尚無確切的標準,如何明確疾病發生發展過程中的適度自噬與過度自噬,進而尋找以調控自噬靶向的治療措施,還需要不斷深入研究。

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